cPLA₂ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400678-ACT

PLA2G4A codifica a fosfolipase A2 citosólica alfa (cPLA2), uma enzima dependente de cálcio e regulada por fosforilação que hidrolisa seletivamente fosfolipídios de membrana para liberar ácido araquidônico. Essa reação fornece substrato para a biossíntese de eicosanoides pelas vias da ciclo-oxigenase e da lipoxigenase, ligando a atividade da cPLA2 à produção de prostaglandinas e leucotrienos durante a sinalização inflamatória. A cPLA2 integra sinais de MAPK/ERK e de outras cascatas de quinases responsivas ao estresse para coordenar a geração de mediadores lipídicos, a remodelação de membranas e o tráfego vesicular. A desregulação da sinalização de PLA2G4A tem sido associada a estados inflamatórios crônicos, patologia vascular e biologia do microambiente associado a tumores, tornando-a um nó útil para estudos mecanísticos de redes de sinalização impulsionadas por lipídios.

cPLA2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PLA2G4A sem alterar a sequência de ADN subjacente.

cPLA2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PLA2G4A em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PLA2G4A, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de cPLA2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PLA2G4A nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de cPLA2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via cPLA2 em células tumorais com expressão de PLA2G4A silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.