Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
CPI-17 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401966
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- CPI-17 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico CPI-17, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CPI-17 Anticuerpo (F-4): sc-48406
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
CPI-17 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401966 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
PPP1R14A codifica CPI-17, un inhibidor de la fosfatasa de la cadena ligera de miosina (MLCP) dependiente de fosforilación, que potencia la señalización contráctil al estabilizar la fosforilación de la cadena ligera reguladora de la miosina. Tras su fosforilación por quinasas como PKC y por vías asociadas a Rho, CPI-17 suprime la actividad catalítica de PP1 dentro de MLCP para regular el tono del músculo liso, la dinámica del citoesqueleto y la sensibilización al calcio. Este nodo regulador integra la señalización de GPCR y de RhoA/ROCK con la remodelación actomiosínica y los programas de motilidad celular. La desregulación de la actividad de PPP1R14A/CPI-17 se ha vinculado con una contractilidad anómala del músculo liso y con contextos de remodelado proliferativo, lo que respalda su estudio en modelos de fisiopatología cardiovascular, de la vía aérea y gastrointestinal.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO CPI-17 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PPP1R14A en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PPP1R14A junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PPP1R14A tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CPI-17.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PPP1R14A para la investigación de la señalización de CPI-17, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de PPP1R14A críticos para la función de CPI-17
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PPP1R14A para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido CPI-17 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido CPI-17 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PPP1R14A. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CPI-17 (h) y el plásmido HDR CPI-17 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PPP1R14A para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PPP1R14A definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.