CPI-17 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401966

概要

PPP1R14AはCPI-17をコードしており、CPI-17はリン酸化依存的にミオシン軽鎖ホスファターゼ（MLCP）を阻害することで、ミオシン制御軽鎖のリン酸化を安定化させ、収縮シグナルを増幅します。PKCやRho関連経路などのキナーゼによってリン酸化されると、CPI-17はMLCP内のPP1触媒活性を抑制し、平滑筋トーヌス、細胞骨格ダイナミクス、カルシウム感受性（Ca感受性）を調節します。この制御ノードは、GPCRおよびRhoA/ROCKシグナルをアクトミオシンのリモデリングや細胞運動プログラムと統合します。PPP1R14A/CPI-17活性の破綻は、異常な平滑筋収縮性や増殖性リモデリングに関連する状況と結び付けられており、心血管・気道・消化管の病態生理モデルにおける研究対象として位置付けられています。

CPI-17 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPPP1R14A遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PPP1R14A内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PPP1R14Aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CPI-17タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CPI-17シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PPP1R14A欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CPI-17の機能に不可欠なPPP1R14Aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PPP1R14Aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CPI-17 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCPI-17 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PPP1R14A遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CPI-17 HDRプラスミド（h）および CPI-17 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPPP1R14Aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPPP1R14A標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。