COL8A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419753

概要

Col8a1 は、非線維性の細胞外マトリックス（ECM）コラーゲンであるコラーゲンVIII型α1（COL8A1）をコードしており、基底膜関連マトリックスや血管関連結合組織に多く存在します。COL8A1 は、インテグリンとの相互作用や MMP 活性を伴うリモデリング・ネットワークを介して、マトリックスの組み立て、細胞‐マトリックス接着、さらに遊走や増殖といった細胞挙動の制御に寄与します。マウス系では、Col8a1 発現の変化やコラーゲンVIIIの沈着は、血管リモデリング、線維化に伴うマトリックス蓄積、創傷に伴う細胞外マトリックス再編成といった文脈でしばしば研究されています。これらの過程は、TGF-β 応答性プログラムや、組織構築や炎症性微小環境を形作るより広範な細胞外マトリックス経路と交差します。

COL8A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCol8a1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Col8a1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Col8a1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、COL8A1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、COL8A1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Col8a1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• COL8A1の機能に不可欠なCol8a1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Col8a1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• COL8A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCOL8A1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Col8a1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  COL8A1 HDRプラスミド（m）および COL8A1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCol8a1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCol8a1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。