COL2A1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400359

Visão geral

COL2A1 codifica a cadeia α1 do colágeno tipo II, um importante colágeno fibrilar que forma a estrutura de suporte da cartilagem hialina e contribui para as propriedades biomecânicas da matriz extracelular. Por meio da montagem em fibrilas de colágeno II e de interações com proteoglicanos, o COL2A1 sustenta a diferenciação de condrócitos, a organização da matriz e a homeostase da cartilagem durante o desenvolvimento esquelético. A expressão de COL2A1 é regulada por programas transcricionais condrogênicos, como vias dirigidas por SOX9, e atua em coordenação com redes de processamento e secreção de colágeno e de remodelamento da matriz extracelular. A alteração genética ou a desregulação de COL2A1 está associada a um espectro de doenças hereditárias da cartilagem e do esqueleto, tornando-o um alvo-chave para o estudo da biologia da matriz extracelular e da patologia dos condrócitos.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO COL2A1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene COL2A1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do COL2A1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do COL2A1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína COL2A1.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de COL2A1 para a investigação da sinalização de COL2A1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) COL2A1 críticos para a função COL2A1
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos COL2A1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo COL2A1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo COL2A1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus COL2A1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo COL2A1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR COL2A1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia COL2A1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo COL2A1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.