Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
CNTFRα Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402322
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- CNTFRα Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico CNTFRα, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: CNTFRα Antibody (AN-B2): sc-9993
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
CNTFRα Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-402322 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
CNTFR (recettore del fattore neurotrofico ciliare, subunità alfa; CNTFRα) codifica una subunità recettoriale ancorata al glicosilfosfatidilinositolo (GPI) che lega il fattore neurotrofico ciliare e si assembla con LIFR e IL6ST/GP130 per avviare la trasduzione del segnale. L’attivazione del recettore stimola le vie JAK/STAT, MAPK/ERK e PI3K/AKT, che regolano la sopravvivenza e la differenziazione neuronale e le risposte gliali, e possono influenzare un più ampio cross-talk nella segnalazione delle citochine. CNTFRα contribuisce alla neurobiologia dello sviluppo e alla biologia neuromuscolare ed è spesso studiato in contesti quali il mantenimento dei motoneuroni, le risposte alle lesioni dei nervi periferici e la segnalazione neuroinfiammatoria. Alterazioni dell’attività dell’asse CNTF–CNTFR sono state associate a fenotipi neurologici e a processi rilevanti per la malattia, come l’integrità assonale, l’innervazione muscolare e la regolazione del destino cellulare.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CNTFRα (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CNTFR in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CNTFR insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CNTFR a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CNTFRα.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CNTFR per lo studio della segnalazione di CNTFRα, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni CNTFR critici per la funzione di CNTFRα
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CNTFR per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal CNTFRα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CNTFRα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CNTFR. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal CNTFRα Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CNTFRα (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CNTFR per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CNTFR definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.