Clusterin Plasmide Double Nickase (m): sc-419695-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Clusterin Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Clusterin Double Nickase Plasmid (m) e il Clusterin Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Clu. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Clusterin-α Antibody (A-11): sc-166831
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Clusterin Plasmide Double Nickase (m) | sc-419695-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Clusterin Plasmide Double Nickase (m2) | sc-419695-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene Clu del topo codifica la clusterina, una glicoproteina secreta e intracellulare che funge da chaperone extracellulare e da modulatore del controllo qualità delle proteine in condizioni di stress. La clusterina partecipa al trasporto dei lipidi e alla regolazione del complemento, contribuendo all’omeostasi di membrana e alla segnalazione infiammatoria, ed è collegata a vie che governano l’apoptosi, le risposte allo stress ossidativo e la proteostasi. Nel sistema nervoso e nei tessuti periferici, un’alterata espressione di CLU è stata associata a fenotipi di aggregazione proteica, neuroinfiammazione e rimodellamento tissutale legato all’età. Queste proprietà rendono Clu un bersaglio utile per analizzare reti adattative allo stress, la dinamica del proteoma extracellulare e le risposte cellulari associate al complemento in modelli murini.
Clusterin Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Clu nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Clu. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Clu. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Clu interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.