ClpP CRISPR/Cas9 케이오 플라스미드 (m): sc-424769

개요

Clpp는 미토콘드리아 기질(matrix)에서 ATP 의존성 카세이놀리틱 펩티다아제(caseinolytic peptidase)의 단백질분해 소단위인 ClpP를 암호화한다. ClpP는 세린 프로테아제로서 ClpX 언폴다아제와 협력해 손상되거나 잘못 접힌 단백질을 제거하고, 기질 내 단백질 항상성(proteostasis)을 유지한다. 이러한 품질 관리 축은 산화적 인산화 능력을 뒷받침하고 단백질 독성 및 산화 스트레스를 제한하며, 미토콘드리아 언폴디드 단백질 반응(mtUPR) 신호전달에도 영향을 준다. ClpP 활성은 에너지 대사, 미토콘드리아 생합성, 그리고 스트레스 적응형 전사 프로그램을 조절하는 경로들과 연결된다. CLPP 기능의 조절 이상은 미토콘드리아 기능장애 표현형과 연관되어 왔으며, 신경퇴행, 대사질환, 그리고 암에서의 미토콘드리아 재배선과 관련된 모델에서 흔히 연구된다.

ClpP CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m)는 mouse 세포주에서 Clpp 유전자의 표적 파괴를 위해 설계된 플라스미드 풀입니다. 각 플라스미드는 Clpp 유전자 내의 서로 다른 부위를 표적으로 하는 고유한 단일 가이드 RNA(sgRNA)와 Streptococcus pyogenes Cas9 뉴클레아제를 함께 발현합니다. 또한 이 플라스미드들은 GFP를 암호화하여, 형광 현미경이나 유세포 분석기를 통해 성공적으로 형질전환된 세포를 형광으로 식별하고 농축할 수 있게 합니다.

다중 가이드 설계는 Cas9에 의한 이중 가닥 절단 형성 후 Clpp의 개방 독서 틀(ORF)을 파괴하는 삽입 또는 결실(indel)이 발생할 가능성을 높입니다. CRISPR/Cas9 시스템에 의해 유발된 DNA 절단은 내인성 비동종 말단 결합(NHEJ) 경로를 통해 복구되며, 이는 종종 ClpP 단백질 발현을 소멸시키는 프레임 시프트 돌연변이를 초래합니다.

이 CRISPR 녹아웃 시스템은 ClpP 신호 전달 연구, 기능 유전체학 연구, 암 생물학 연구 및 인간 세포주에서의 치료 반응 평가를 위한 Clpp 결핍 세포 모델을 효율적으로 생성할 수 있게 합니다.

주요 특징

• ClpP 기능에 중요한 Clpp 엑손을 표적하는 sgRNA
  전달을 단순화하기 위해 단일 플라스미드에서 SpCas9 및 sgRNA의 공동 발현
  형질전환된 세포 식별을 위한 GFP 리포터
  녹아웃 효율 향상을 위해 여러 Clpp 게놈 부위를 표적하는 플라스미드 풀
  형질전환을 통한 전달과 호환

설계 변형

CRISPRs +/- HDR

• ClpP CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m) 및 ClpP CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m2)에 의해 암호화되는 gRNA는 Clpp 유전자좌 내의 서로 다른 부위를 표적화합니다. 표적화 설계 중 하나 또는 둘 다 이용 가능할 수 있습니다. 구입 가능 여부는 관련 제품을 참조하십시오.
  ClpP HDR 플라스미드 (m) 및 ClpP HDR 플라스미드 (m2)에 의해 암호화되는
  HDR 기증자 컨스트럭트는 푸로마이신 내성 카세트와 RFP 리포터를 포함하며, 이는 CRISPR/Cas9 KO 설계에 해당하는 정의된 Clpp 표적 부위에서의 상동성 유도 복구를 지원하기 위해 Clpp 상동성 암으로 둘러싸여 있습니다. HDR 기증자의 재고 여부는 달라질 수 있습니다. 재고 여부는 관련 제품을 참조하십시오.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.