CLC-7 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404550

概要

CLCN7 は、電位依存性の Cl⁻/H⁺ 逆輸送体である CLC-7 をコードしており、CLC-7 は主として後期エンドソームおよびリソソームに局在し、オルガネラの酸性化とイオン恒常性の維持を支えます。CLC-7 は、V-ATPase が作るプロトン勾配に塩化物フラックスを共役させることで、リソソームの分解能、エンドリソソーム輸送、ならびにオートファジー‐リソソーム経路の機能を調節します。CLC N7 活性は、骨吸収窩の酸性化と骨基質の代謝回転において破骨細胞で特に重要であり、CLC-7 依存的なリソソーム生理の破綻は、骨格系および神経変性の表現型と関連づけられています。これらの特性により、CLCN7 は、リソソーム生物学、細胞内膜におけるイオン輸送、そして組織恒常性に対する細胞種特異的な寄与を研究するための有用な標的となります。

CLC-7 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCLCN7遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CLCN7内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CLCN7のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CLC-7タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CLC-7シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CLCN7欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CLC-7の機能に不可欠なCLCN7エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CLCN7ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CLC-7 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびCLC-7 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CLCN7遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CLC-7 HDRプラスミド（h）および CLC-7 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCLCN7ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCLCN7標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。