CLC-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405071-ACT

O gene humano **CLCN1** codifica o canal de cloreto do músculo esquelético **CLC-1**, uma condutância dependente de voltagem que estabiliza o potencial de membrana de repouso do sarcolema e limita pós-descargas de potenciais de ação durante disparos repetitivos. Ao fornecer a permeabilidade dominante ao cloreto em fibras musculares maduras e contribuir para a homeostase iônica no sistema de túbulos transversos, o CLC-1 ajuda a regular a excitabilidade da membrana e a dinâmica do acoplamento excitação–contração. A disfunção de **CLCN1** está associada a alterações na condutância de cloreto e a fenótipos de hiperexcitabilidade característicos da miotonia congênita, tornando-o um alvo central para estudar mecanismos de excitabilidade neuromuscular. Assim, **CLCN1** é amplamente utilizado em pesquisas sobre eletrofisiologia muscular, transporte iônico e relações genótipo–fenótipo em canalopatias.

CLC-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CLCN1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CLC-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CLCN1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CLCN1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CLC-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CLCN1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CLC-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CLC-1 em células tumorais com expressão de CLCN1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.