CKR-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419705

概要

Ccr2 はケモカイン受容体 CKR-2（CCR2）をコードしており、CCL2/MCP-1 などの関連リガンドに結合する 7 回膜貫通型の GPCR である。CKR-2 はこれらのリガンドにより活性化されると、Gαi 依存性経路を介して PI3K/AKT および MAPK カスケード、カルシウムフラックス、インテグリン活性化、細胞骨格のリモデリングを調節し、白血球のトラフィッキングや炎症性の分極化に影響を与える。マウスでは、Ccr2 活性は組織障害や感染部位への炎症性単球の動員において中心的な役割を担い、多様な炎症性微小環境におけるマクロファージの集積にも影響する。CCR2 軸シグナルの異常は、慢性炎症、神経炎症、腫瘍随伴骨髄系細胞の生物学において、免疫細胞浸潤やサイトカインネットワークを駆動する要因として頻繁に研究されている。

CKR-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるCcr2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ccr2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ccr2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、CKR-2タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、CKR-2シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ccr2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• CKR-2の機能に不可欠なCcr2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ccr2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• CKR-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびCKR-2 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ccr2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  CKR-2 HDRプラスミド（m）および CKR-2 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCcr2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCcr2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。