Plásmido Doble Nickase (h) citrate synthase: sc-402227-NIC

El gen humano **CS** codifica la citrato sintasa, una enzima de la matriz mitocondrial que cataliza la condensación de oxaloacetato y acetil‑CoA para formar citrato, iniciando el flujo a través del ciclo del ácido tricarboxílico (TCA). Al controlar la entrada al metabolismo oxidativo, la citrato sintasa sostiene la producción de NADH/FADH2 para la cadena de transporte de electrones e influye en la anaplerosis/cataplerosis que conecta el metabolismo de carbohidratos, lípidos y aminoácidos. La actividad de CS se relaciona con la bioenergética mitocondrial, la homeostasis redox y procesos biosintéticos dependientes de citrato, como la síntesis de ácidos grasos y esteroles. La alteración del metabolismo mitocondrial que involucra la función del ciclo TCA se examina con frecuencia en contextos como la desregulación metabólica, la neurodegeneración y fenotipos proliferativos en los que se remodelan la capacidad mitocondrial y la utilización de sustratos.

citrate synthase El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CS en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CS. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CS. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CS alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.