CIITA Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-419390-ACT

O gene **Ciita** do camundongo codifica a **CIITA**, um coativador mestre de transcrição indispensável para a expressão dos genes do **complexo principal de histocompatibilidade de classe II (MHC II)** e para a apresentação de antígenos em células apresentadoras de antígeno profissionais. A CIITA integra sinais de **interferon-γ** e outras vias de sinalização imune para coordenar programas transcricionais que moldam a ativação da imunidade adaptativa, o *priming* de células T e respostas inflamatórias. Alterações na atividade de CIITA afetam a regulação da via de MHC II e são frequentemente estudadas em contextos de desregulação imune, interações hospedeiro–patógeno e remodelação do microambiente tumoral–imune. Como um nó central na apresentação de antígenos, a CIITA oferece um ponto de entrada funcional para dissecar o controle transcricional de redes gênicas imunes.

CIITA O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Ciita sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CIITA O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Ciita em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Ciita, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CIITA. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Ciita nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CIITA no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CIITA em células tumorais com expressão de Ciita silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.