CIITA Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401762-ACT

A CIITA (ativador transcricional do complexo principal de histocompatibilidade de classe II) humana é um regulador transcricional mestre que coordena a expressão induzível de genes de MHC classe II e de componentes associados ao processamento de antígenos. Atuando a jusante de sinais de citocinas e da imunidade inata, incluindo a sinalização dirigida por interferons, a CIITA integra programas transcricionais que controlam a apresentação de antígenos, a ativação inicial da imunidade adaptativa e a responsividade imune específica de cada tipo celular. A atividade desregulada de CIITA altera a vigilância imunológica e a sinalização inflamatória, com relevância para defeitos de apresentação de antígenos, padrões de expressão gênica associados à autoimunidade e mecanismos de evasão imune tumoral. Como um coativador que não se liga diretamente ao DNA e que monta complexos do tipo enhanceossomo em promotores de MHC II, a CIITA é amplamente usada para investigar o controle transcricional de loci HLA e a remodelação de fenótipos imunes em diversos modelos celulares.

CIITA O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CIITA sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CIITA O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CIITA em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CIITA, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CIITA. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CIITA nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CIITA no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CIITA em células tumorais com expressão de CIITA silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.