CHT1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404869-ACT

SLC5A7は高親和性コリントランスポーター1（CHT1）をコードしており、CHT1は形質膜に存在する溶質キャリアとして、ナトリウム依存的なコリン取り込みを担います。これはコリン作動性ニューロンにおけるアセチルコリン合成の律速段階です。コリンアセチルトランスフェラーゼに対する細胞内コリン供給量を制御することで、CHT1は膜輸送をシナプス小胞サイクルおよび持続的なコリン作動性神経伝達に結び付けています。SLC5A7活性の変化は、神経筋および中枢のコリン作動性シグナル伝達の障害と関連づけられており、このトランスポーターが運動機能、認知過程、自律神経調節に関わる経路と結び付くことを示しています。シナプス前におけるアセチルコリン産生を規定する因子として、CHT1は神経分化モデルや、シナプス伝達および神経伝達物質合成への代謝的カップリングを検討する系で頻繁に研究されています。

CHT1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLC5A7の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CHT1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLC5A7 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLC5A7転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CHT1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLC5A7遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCHT1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLC5A7発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCHT1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。