CHMP4B CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401802-ACT

ヒトCHMP4Bは、エンドソーム膜上で重合し、多胞体（MVB）形成過程における膜のくびれ形成と切断を駆動するESCRT-III複合体の中核構成要素をコードしています。ESCRT依存的なトラフィッキングを介して、CHMP4Bは受容体のダウンレギュレーション、リソソームへの標的化、シグナル伝達複合体の分解・ターンオーバーの制御に関与し、成長因子シグナルや細胞恒常性に関連する経路に影響を与えます。ESCRT-III活性は、細胞質分裂の終盤における切断（アブシジョン）段階も支えるほか、核膜の再形成や細胞膜修復にも寄与します。CHMP4Bを含むESCRT構成因子の機能不全は、エンドリソソーム動態の変化と関連して報告されており、神経変性、がん細胞のシグナル伝達、ウイルス出芽機構の研究において重要なテーマとなっています。

CHMP4B CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CHMP4Bの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CHMP4B CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CHMP4B 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCHMP4B転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CHMP4Bの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCHMP4B遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCHMP4B依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCHMP4B発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCHMP4B経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。