cGAS CRISPR Activationプラスミド (m): sc-437363-ACT

マウスMb21d1はcGASをコードしており、cGASは細胞質DNAセンサーとして二本鎖DNAに結合すると2′3′-cGAMPの合成を触媒し、STING–TBK1–IRF3軸を介して自然免疫シグナル伝達を開始します。この経路はI型インターフェロンおよび炎症性遺伝子プログラムを誘導し、抗ウイルス制限、サイトカイン産生、免疫原性細胞死応答とも統合されます。cGAS活性はゲノム不安定性やミトコンドリアDNAの漏出と密接に関連しており、DNA損傷応答と炎症シグナル伝達を結び付けます。cGAS–STINGシグナル伝達の破綻は自己炎症に関与するとされ、がん、神経炎症、代謝ストレスモデルにおける炎症性表現型にも寄与することから、Mb21d1は機序解明研究における重要な結節点となっています。

cGAS CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Mb21d1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

cGAS CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Mb21d1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMb21d1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性cGASの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMb21d1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるcGAS依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMb21d1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるcGAS経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。