CENP-F Double Nickase Plasmid (h): sc-402178-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CENP-F Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CENP-F Double-Nickase-Plasmid (h) und CENP-F Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CENPF abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CENP-F Double Nickase Plasmid (h) | sc-402178-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CENP-F Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402178-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CENPF kodiert CENP-F, ein großes, mit dem Kinetochor assoziiertes Protein, das sich während der G2/M-Phase anreichert und die Chromosomenkongression, die Zuverlässigkeit des Spindelkontrollpunkts sowie die Anheftung von Mikrotubuli an die Kinetochoren koordiniert. CENP-F wirkt in Netzwerken der mitotischen Progression und verknüpft die Zentromerstruktur mit dynein-/dynaktinvermitteltem Transport sowie dem korrekten Wiederaufbau der Kernhülle nach der Mitose. Eine fehlregulierte CENPF-Expression wird häufig in proliferativen Zuständen beobachtet und wurde in Studien zur Krebsbiologie mit genomischer Instabilität und einer veränderten Zellzykluskontrolle in Verbindung gebracht. Als Regulator der Zellteilung wird CENP-F breit als Marker und mechanistischer Knotenpunkt genutzt, um Mitose-Defekte, Aneuploidie und Signalwege der Chromosomentrennung in menschlichen Zellen zu untersuchen.
CENP-F Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CENPF-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CENPF abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CENPF-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CENPF-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.