Cdk5 Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-419602-NIC

A quinase dependente de ciclina 5 (Cdk5) de camundongo é uma quinase de serina/treonina dirigida por prolina que se torna cataliticamente ativa por meio da associação com cofatores não ciclinas, como p35 (Cdk5r1) e p39 (Cdk5r2). A Cdk5 regula a migração neuronal, o crescimento de neuritos, a dinâmica de vesículas sinápticas e a remodelação do citoesqueleto via fosforilação de substratos nas redes de microtúbulos e actina, fazendo interface com a sinalização de MAPK e vias de quinases independentes do ciclo celular. A atividade desregulada de Cdk5 tem sido associada a fenótipos neurodegenerativos e do neurodesenvolvimento por meio de fosforilação alterada de tau e outros substratos neuronais, bem como por homeostase sináptica comprometida. Além da biologia do sistema nervoso, a sinalização de Cdk5 contribui para respostas ao estresse e para a regulação dependente do contexto de adesão e motilidade, sustentando estudos mecanísticos em múltiplos tipos celulares.

Cdk5 O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Cdk5 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Cdk5. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Cdk5. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Cdk5 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.