CDK11 Double Nickaseプラスミド (h): sc-405330-NIC

ヒトCDK19は、シグナル伝達の入力をRNAポリメラーゼII依存性転写と統合するメディエーター・キナーゼモジュール内で機能するサイクリン依存性キナーゼをコードします。転写調節因子をリン酸化し、プロモーター近傍でのポリメラーゼの一時停止（ポーズ）解除に影響を与えることで、CDK19は細胞周期進行、ストレス応答、分化に関連する遺伝子発現プログラムの制御に寄与します。メディエーター関連CDKの活性や発現の変化は、がんやその他の増殖性疾患における転写プログラムの再編成と関連づけられており、CDK19は腫瘍性および炎症性シグナル伝達ネットワークを解明するうえで重要な標的となります。CDK11タンパク質ファミリーのメンバーも同様に転写や細胞周期関連過程に関与するとされており、ヒト生物学におけるCDKによる転写制御の重要性をさらに示しています。

CDK11 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CDK19 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CDK19内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CDK19の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CDK19が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。