Plásmido Doble Nickase (h) Cdc5L: sc-404611-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Cdc5L consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Cdc5L (h) y el plásmido de doble nickasa Cdc5L (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CDC5L. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Cdc5L Anticuerpo (D-11): sc-398280
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Cdc5L | sc-404611-NIC | 20 µg | $410.00 |
CDC5L codifica Cdc5L, una proteína nuclear conservada que actúa como componente central del complejo asociado a Prp19, necesario para la activación del espliceosoma y el empalme del pre-ARNm. Cdc5L favorece el procesamiento correcto de exones e intrones y se coordina con el control del ciclo celular al promover la progresión mitótica, vinculando el metabolismo del ARN con las vías de control de puntos de control y de respuesta al daño del ADN. A través de estas funciones, CDC5L influye en la fidelidad del transcriptoma y en la estabilidad del genoma, procesos que con frecuencia se ven alterados en trastornos proliferativos y en el cáncer. La actividad alterada de CDC5L se ha asociado con programas de empalme desregulados y dinámicas anómalas del ciclo celular, lo que lo convierte en una diana útil para estudios mecanísticos de fenotipos impulsados por el procesamiento del ARN.
Cdc5L El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CDC5L en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CDC5L. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CDC5L. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CDC5L alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.