CD96 Double Nickaseプラスミド (h): sc-407300-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- CD96 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- CD96ダブルニカースプラスミド（h）およびCD96ダブルニカースプラスミド（h2）は、CD96を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: CD96 抗体 (NK92.50.1): sc-53574
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
CD96 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-407300-NIC | 20 µg | $410.00 |
CD96は、T細胞およびNK細胞の一部サブセットに発現するI型膜貫通型の免疫グロブリンスーパーファミリー受容体をコードしており、CD155（PVR）やCD111（NECTIN1）などのネクチン／ネクチン様リガンドとの相互作用を介して、免疫シナプス形成とエフェクター機能を調節する。接着分子ネットワークおよび共抑制／共刺激シグナルのネットワーク内のシグナルを統合することで、CD96は腫瘍微小環境における細胞傷害活性、サイトカイン産生、ならびにリンパ球の活性化閾値に影響を及ぼす。CD96活性の変化は免疫回避や抗腫瘍免疫の変動と関連づけられており、共通のリガンドを競合するTIGITやCD226を含むチェックポイント経路とあわせて検討されることが多い。これらの特性により、CD96はがん免疫学および炎症性疾患研究に関連する免疫制御回路を解明するための有用な標的となっている。
CD96 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CD96 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CD96内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CD96の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CD96が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。