CD9 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400252-NIC

CD9はテトラスパニンに属する細胞表面タンパク質であり、インテグリンや免疫グロブリンスーパーファミリー受容体、他のテトラスパニンと協調して膜マイクロドメインを組織化し、接着、細胞運動、膜融合といった事象を統合的に制御します。ヒト細胞においてCD9はエンドサイトーシスや小胞輸送に関与し、細胞骨格の再構築に結び付くシグナル出力を調節します。これには細胞移動や細胞外マトリックスとの相互作用に影響する経路も含まれます。CD9は細胞外小胞にも豊富に存在し、エクソソームマーカーとして広く用いられているため、細胞間コミュニケーションや小胞生合成の研究を支えています。さらに、CD9の発現量や局在の変化は、さまざまながんの文脈で浸潤の制御異常、免疫細胞との相互作用、転移性の挙動と関連付けられており、疾患の機序モデルにおいて重要な分子です。

CD9 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における CD9 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、CD9内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、CD9の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、CD9が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。