CD69 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h2): sc-416315-LAC-2

O CD69 humano codifica a proteína CD69, um receptor de lectina do tipo C transmembranar do tipo II rapidamente induzido em células T, células B, células NK e outros leucócitos ativados, onde atua como um marcador precoce de ativação e modulador da sinalização imune. O CD69 influencia o tráfego de linfócitos e a retenção tecidual por meio da regulação do receptor 1 de esfingosina-1-fosfato (S1PR1) e contribui para programas a jusante que afetam a produção de citocinas, a proliferação e a dinâmica da sinapse imune. Por meio de suas funções na ativação imune, na imunidade mucosa e de células residentes em tecidos e em redes de sinalização inflamatória, o CD69 está implicado na desregulação imune observada na autoimunidade, na inflamação crônica, em infecções e em microambientes imunes tumorais. A edição gênica ou a perturbação funcional do CD69 em células humanas sustenta estudos mecanísticos de circuitos transcricionais dependentes de ativação, do controle de migração/egresso e da fenotipagem de células imunes em modelos de pesquisa in vitro e ex vivo.

As Partículas de Ativação Lentivirais CD69 (h2) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de CD69 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais CD69 (h2) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição CD69, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de CD69. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo CD69 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.