CD69 CRISPR Activationプラスミド (m2): sc-419566-ACT-2

マウスCd69はCD69をコードしており、CD69は抗原受容体刺激またはサイトカイン刺激により迅速に発現が誘導されるC型レクチン様の細胞表面受容体で、リンパ球活性化の早期マーカーとして用いられる。CD69は、スフィンゴシン-1-リン酸受容体（S1PR）シグナルの調節を介するなどして免疫細胞の遊走や組織内滞留を制御し、さらにNF-κBやMAPKに関連する応答を含む下流の活性化プログラムにも影響を与えて、T細胞およびNK細胞のエフェクター機能を形作る。CD69活性の変化は、炎症、自己免疫、腫瘍免疫のモデルにおける免疫調節異常と関連づけられており、活性化と移動のシグナルのバランスを取る役割を反映している。マウス系でのCd69遺伝子編集は、活性化キネティクス、組織常在性免疫細胞の生物学、ならびに初代細胞やin vivo免疫学モデルにおける経路撹乱解析などの機構研究を支える。

CD69 CRISPR活性化プラスミド（m2）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Cd69の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CD69 CRISPR 活性化プラスミド (m2) は、ヒト細胞株における Cd69 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCd69転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CD69の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCd69遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCD69依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCd69発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCD69経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。