CD69 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h2): sc-416315-ACT-2

O CD69 humano codifica o CD69, um receptor de lectina do tipo C induzido precocemente pela ativação e rapidamente superexpresso em células T, células B, células NK e outros leucócitos após estimulação por receptores de antígeno ou por citocinas. O CD69 modula o tráfego de células imunes e a retenção tecidual, em parte por meio de interações funcionais que influenciam a saída dependente de S1PR1, e molda programas inflamatórios a jusante ligados à sinalização de NF-κB/MAPK e à produção de citocinas. A expressão desregulada de CD69 tem sido associada a estados alterados de ativação imune em doenças autoimunes e inflamatórias, em microambientes imunológicos tumorais e em contextos de infecção crônica. A edição gênica de CD69 dá suporte a estudos mecanísticos de ativação, migração e imunometabolismo de linfócitos, bem como à investigação funcional de subpopulações de células imunes em ensaios de cocultura, modelos de organoides e perfilamento imunológico in vivo.

CD69 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CD69 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD69 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h2) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CD69 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CD69, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD69. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CD69 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD69 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD69 em células tumorais com expressão de CD69 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.