CD68 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400211-ACT

CD68 (também conhecido como macrosialina) codifica uma proteína de membrana lisossomal/endossomal fortemente glicosilada, altamente enriquecida em monócitos, macrófagos e micróglia, onde é amplamente usada como marcador da abundância de fagolisossomos e do estado de ativação mieloide. O CD68 participa do tráfego endocítico e de processos associados à fagocitose, conectando a sinalização imune inata à função dos lisossomos e ao processamento/apresentação de antígenos. Alterações na expressão de CD68 acompanham a ativação de macrófagos e micróglia em contextos de remodelação tecidual inflamatória, disfunção metabólica e neuroinflamação, refletindo mudanças nos programas de diferenciação e ativação mieloides. Como leitura do estado de células mieloides, o CD68 é frequentemente avaliado em conjunto com vias de citocinas, interferons e metabolismo/manuseio de lipídios para relacionar o fenótipo celular aos microambientes imunológicos.

CD68 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CD68 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD68 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CD68 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CD68, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD68. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CD68 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD68 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD68 em células tumorais com expressão de CD68 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.