CD68 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400211-ACT

CD68 (noto anche come macrosialina) codifica una proteina di membrana lisosomiale/endosomiale fortemente glicosilata, particolarmente abbondante in monociti, macrofagi e microglia, dove è ampiamente utilizzata come marcatore dell’abbondanza dei fagolisosomi e dello stato di attivazione mieloide. CD68 partecipa al traffico endocitico e ai processi associati alla fagocitosi, collegando la segnalazione dell’immunità innata alla funzione dei lisosomi e alla gestione degli antigeni. Un’espressione alterata di CD68 accompagna l’attivazione di macrofagi e microglia in contesti di rimodellamento tissutale infiammatorio, disfunzioni metaboliche e neuroinfiammazione, riflettendo cambiamenti nei programmi di differenziazione e attivazione mieloide. Come indicatore dello stato delle cellule mieloidi, CD68 viene spesso valutato insieme a vie legate a citochine, interferoni e metabolismo/gestione dei lipidi, per collegare il fenotipo cellulare ai microambienti immunitari.

CD68 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CD68 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CD68 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CD68 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CD68, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CD68. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CD68 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CD68 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CD68 nelle cellule tumorali con espressione di CD68 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.