CD55 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400738-ACT

CD55（decay-accelerating factor：DAF）は、グリコシルホスファチジルイノシトール（GPI）アンカー型の補体制御タンパク質であり、C3/C5コンバターゼの崩壊（decay）を促進することで、補体介在性の傷害から宿主細胞を保護する。下流の炎症性および溶解性の補体成分の形成を抑えることで、CD55は細胞表面における自然免疫シグナル伝達のあり方を調整し、組織微小環境内での免疫細胞間相互作用にも影響を及ぼす。CD55の発現変化は、炎症性疾患や多様ながんの文脈で認められる、補体活性の制御不全や免疫回避の表現型に関与することが示唆されている。ヒト細胞モデルでは、CD55を操作することにより、補体制御、膜タンパク質トラフィッキング、免疫認識経路を研究するための扱いやすい手段が得られる。

CD55 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CD55の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CD55 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CD55 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCD55転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CD55の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCD55遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCD55依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCD55発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCD55経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。