CD44 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-400209-LAC

O CD44 humano codifica uma glicoproteína transmembranar amplamente expressa que atua como principal recetor do hialuronano e de outros ligandos da matriz extracelular, coordenando interações célula–célula e célula–matriz. Por meio de sinalização específica de isoformas e do acoplamento ao citoesqueleto, o CD44 influencia a adesão, a migração, o homing de linfócitos e a dinâmica epitélio–mesênquima, integrando sinais da matriz extracelular com vias intracelulares, como a remodelação mediada por GTPases Rho e a comunicação cruzada com recetores tirosina-quinase. A atividade do CD44 está frequentemente associada a respostas inflamatórias e à remodelação tecidular, e alterações nos padrões de expressão ou de splicing têm sido relacionadas com invasão tumoral, fenótipos associados à metástase e propriedades de células semelhantes a células estaminais tumorais. Essas características tornam o CD44 um alvo útil para estudar a sinalização do microambiente, o tráfego de leucócitos e a regulação da expressão génica impulsionada pela matriz extracelular.

As Partículas de Ativação Lentivirais CD44 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de CD44 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais CD44 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição CD44, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de CD44. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo CD44 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.