CD42c Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403712-ACT

GP1BB codifica a glicoproteína Ib beta (CD42c), uma subunidade essencial do complexo receptor plaquetário GPIb-IX-V, que medeia a adesão das plaquetas ao fator de von Willebrand em condições de elevado cisalhamento. Por meio de sinalização coordenada com outros componentes do complexo, o CD42c sustenta a captura inicial das plaquetas, a ativação e os rearranjos do citoesqueleto que influenciam a formação do trombo e as respostas hemostáticas. A disrupção ou a expressão alterada de GP1BB prejudica a montagem e a função do receptor na superfície plaquetária, associando essa via a defeitos hereditários de adesão plaquetária e a fenótipos de sangramento anormais. Como resultado, a regulação de GP1BB é frequentemente estudada em modelos de megacariopoiese, biogênese plaquetária e sinalização plaquetária dependente de cisalhamento.

CD42c O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GP1BB sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD42c O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GP1BB em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GP1BB, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD42c. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GP1BB nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD42c no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD42c em células tumorais com expressão de GP1BB silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.