CD3-ζCRISPR激活质粒(h): sc-400591-ACT

CD247 编码 CD3-ζ（CD3ζ）链，是 T 细胞受体（TCR）–CD3 复合物的关键组成部分，包含免疫受体酪氨酸基激活基序（ITAM），这些基序对于抗原驱动的信号传导必不可少。TCR 结合抗原后，CD3ζ 的磷酸化促进 ZAP70 的募集，并通过 LAT/SLP-76 信号复合体继续传递信号，从而激活下游的 MAPK、NF-κB 和 NFAT 通路，进而塑造 T 细胞活化、细胞因子产生以及细胞毒效应功能。CD247 的表达水平或信号传导能力发生改变与免疫失调及淋巴细胞应答受损有关，包括肿瘤相关的 T 细胞功能障碍以及与自身免疫相关的信号失衡。作为适应性免疫中的近端接头蛋白，CD3ζ 常被用于研究 T 细胞发育、活化阈值以及工程化受体信号传导。

CD3-ζ CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CD247的表达。

CD3-ζ CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的CD247基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于CD247转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性CD3-ζ表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的CD247位点，并能够研究内源性位点上依赖于CD3-ζ的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CD247表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟CD3-ζ通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。