CD28 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401525-ACT

O CD28 humano codifica um recetor coestimulador expresso em células T que se liga a ligandos da família B7 (CD80/CD86) para amplificar a sinalização do recetor de células T e apoiar a ativação completa. A ativação do CD28 promove a produção de IL-2, a sobrevivência e a reprogramação metabólica através das vias PI3K–AKT–mTOR, NF-κB e MAPK, influenciando a proliferação, a diferenciação e a produção de citocinas. A desregulação da sinalização do CD28 está implicada em patologia mediada pelo sistema imunitário e na evasão imunitária tumoral, e a expressão ou a sinalização alteradas podem afetar respostas em modelos de autoimunidade, infeção crónica e imunologia do cancro. Assim, o CD28 é um nó-chave para estudar limiares de ativação de células T, interações com checkpoints e a dinâmica do microambiente imunitário.

CD28 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CD28 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD28 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CD28 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CD28, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD28. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CD28 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD28 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD28 em células tumorais com expressão de CD28 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.