Plásmido CRISPR de Activación (h) CD26: sc-400862-ACT

DPP4 codifica CD26, una glucoproteína transmembrana de tipo II con actividad de dipeptidil peptidasa que trunca determinadas quimiocinas, incretinas y otros péptidos bioactivos, modelando así los gradientes de señalización extracelular y el tráfico de células inmunitarias. Más allá del procesamiento enzimático, CD26 participa en la señalización coestimuladora y en procesos relacionados con la adhesión mediante interacciones con la matriz extracelular y con socios de la superficie celular, lo que influye en la activación de las células T y en las respuestas inflamatorias. En tejidos humanos, la expresión de DPP4/CD26 se ha vinculado a vías que regulan la migración de leucocitos, la señalización de citocinas y la regulación metabólica. La actividad o expresión desregulada de CD26 se estudia en contextos que incluyen la inflamación mediada por el sistema inmunitario, la biología del microambiente tumoral y los mecanismos de enfermedades metabólicas.

CD26 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DPP4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CD26 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DPP4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DPP4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CD26. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DPP4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CD26 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CD26 en células tumorales con expresión de DPP4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.