CD223 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406616-ACT

LAG3 (CD223) é um receptor inibitório de checkpoint imunológico expresso principalmente em células T ativadas, células T reguladoras, células NK e em alguns subconjuntos de células dendríticas, onde modula a ativação induzida por antígeno e a função efetora. Ao se ligar ao MHC de classe II e a ligantes relacionados, o CD223 atenua a sinalização do TCR e contribui para a tolerância periférica, para programas de exaustão de células T e para a regulação da produção de citocinas. A atividade de LAG3 se cruza com vias que governam a organização da sinapse imunológica, redes de coestimulação/checkpoints e estados transcricionais inflamatórios. A sinalização desregulada de CD223 tem sido implicada na exaustão imune associada a infecções crônicas, em contextos de evasão imune tumoral e em inflamação autoimune, tornando-o um alvo relevante para estudos mecanísticos em imunologia.

CD223 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LAG3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD223 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LAG3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LAG3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD223. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LAG3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD223 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD223 em células tumorais com expressão de LAG3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.