CD20 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-416765-ACT

MS4A1 kodiert CD20, ein tetraspanes Membranprotein, das überwiegend auf B-Lymphozyten vom Prä‑B‑ bis zum reifen Stadium exprimiert wird und an der Regulation von B‑Zell‑Aktivierung, Proliferation und Differenzierung beteiligt ist. CD20 trägt zur Organisation der Membran sowie zu kalziumflussassoziierten Signalereignissen bei, die während der antigengetriebenen Aktivierung nachgeschaltete transkriptionelle Antworten prägen. Eine veränderte MS4A1-Expression und CD20‑abhängige Signalwege werden häufig im Kontext der Biologie der B‑Zell‑Linie und von Immundysregulation untersucht. Als Oberflächenmarker, der eng mit der B‑Zell‑Identität verknüpft ist, wird CD20 breit eingesetzt, um Signalwege zu untersuchen, die die B‑Zell‑Homöostase und pathogene B‑Zell‑Zustände steuern.

CD20 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MS4A1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CD20 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MS4A1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MS4A1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CD20-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MS4A1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CD20-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CD20-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MS4A1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.