CD16 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400544-NIC

FCGR3AはCD16（FcγRIIIa）をコードしており、IgGのFcに対する低親和性受容体です。CD16はナチュラルキラー（NK）細胞、単球、マクロファージに高発現し、抗体認識を細胞性エフェクター機能へと結び付けます。CD16は、ITAMモチーフを含むFcRγおよびCD3ζのアダプターチェーンを介してシグナルを伝達し、Srcファミリーキナーゼ、SYK/ZAP70経路、カルシウムフラックス、さらに脱顆粒、サイトカイン放出、抗体依存性細胞傷害（ADCC）を制御する下流のMAPKおよびNF-κBプログラムを活性化します。FCGR3Aの遺伝的多型や発現変化は、免疫複合体の処理や炎症のベースラインに影響し、この経路が自己免疫や免疫制御異常と関連することを示しています。CD16の生物学はまた、自然免疫活性化、骨髄系細胞の分極、ならびに腫瘍学および感染症モデルにおける抗体介在性応答の研究においても中核を成します。

CD16 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における FCGR3A 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、FCGR3A内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、FCGR3Aの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、FCGR3Aが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。