CD154 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423452
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- CD154 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico CD154, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:CD154 Anticorpo (F-1): sc-374635
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
CD154 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423452 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Cd40lg codifica o CD154 (ligante de CD40), uma proteína de membrana do tipo II expressa principalmente em células T ativadas, que se liga ao CD40 em células B, células dendríticas e macrófagos para coordenar respostas imunes adaptativas. A sinalização CD154–CD40 promove a ativação das vias NF-κB e MAPK, estimula a produção de citocinas, sustenta a proliferação de células B e as reações de centro germinativo, e contribui para a mudança de classe das imunoglobulinas. Em modelos murinos, alterações na atividade de Cd40lg influenciam a tolerância imunológica, a apresentação de antígenos e circuitos inflamatórios relevantes para autoimunidade, biologia de infecções e imunologia tumoral. Assim, dissecar a coestimulação dependente de CD154 é fundamental para estudar a comunicação entre células T e APCs (células apresentadoras de antígeno) e a organização do tecido linfoide.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO CD154 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Cd40lg em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Cd40lg, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Cd40lg na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína CD154.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Cd40lg para a investigação da sinalização de CD154, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Cd40lg críticos para a função CD154
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Cd40lg para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo CD154 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo CD154 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Cd40lg. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo CD154 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR CD154 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Cd40lg para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Cd40lg definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.