CD137 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405068-ACT

TNFRSF9 codifica o CD137 (4-1BB), um recetor coestimulatório induzível da superfamília dos recetores de TNF, expresso predominantemente em células T ativadas e noutros subtipos de células imunitárias. Após a sua ativação, o CD137 sinaliza através de proteínas adaptadoras TRAF para ativar as vias NF-κB canónica e não canónica, MAPK e PI3K/AKT, promovendo a sobrevivência celular, a produção de citocinas e a manutenção da função efetora. A sinalização dependente de CD137 molda programas de ativação e tolerância imunitária, influenciando a expansão de células T, a formação de memória e as interações com células apresentadoras de antigénio. A atividade desregulada de TNFRSF9/CD137 tem sido associada a inflamação mediada pelo sistema imunitário e a microambientes imunitários tumorais alterados, tornando-o uma ferramenta molecular útil para estudos mecanísticos de regulação imunitária.

CD137 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TNFRSF9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD137 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TNFRSF9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TNFRSF9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD137. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TNFRSF9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD137 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD137 em células tumorais com expressão de TNFRSF9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.