CD109 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402624-ACT

CD109 kodiert ein GPI-verankertes Glykoprotein der Zelloberfläche, das als Korezeptor wirkt und die Signalübertragung des Transforming Growth Factor-β (TGF-β) moduliert, einschließlich Effekten auf die SMAD2/3-Phosphorylierung und den Rezeptorumsatz. Es ist in Subpopulationen epithelialer und mesenchymaler Zellen angereichert und wurde mit der Regulation von Zelladhäsion, Proliferation und Differenzierungsprogrammen in Verbindung gebracht, die mit dem Umbau der extrazellulären Matrix verknüpft sind. Eine veränderte CD109-Expression wurde in mehreren Tumorkontexten und inflammatorischen Mikroumgebungen beschrieben, in denen eine fehlregulierte Aktivität des TGF-β-Signalwegs die epithelial-mesenchymale Transition und Phänotypen der Immunflucht beeinflussen kann. Diese Eigenschaften machen CD109 zu einem nützlichen Ziel, um Crosstalk zwischen Oberflächenrezeptoren und die kontextabhängige Feinabstimmung TGF-β-getriebener transkriptioneller Netzwerke zu untersuchen.

CD109 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CD109-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CD109 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CD109-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CD109-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CD109-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CD109-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CD109-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CD109-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CD109-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.