CCDC89 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-408069-ACT

CCDC89（coiled-coil domain containing 89）は、細胞骨格の組織化や、細胞内の構造維持およびシグナル伝達を支えるタンパク質間相互作用ネットワークに関与すると考えられる、予測上のコイルドコイルタンパク質をコードします。コイルドコイルタンパク質はしばしば、オルガネラの配置、小胞輸送、ストレス応答性経路に影響する足場（スキャフォールド）機能に関与することから、CCDC89も細胞プロセスの空間的な協調を調節している可能性があります。各種ゲノミクスデータセットで報告されている発現レベルおよびバリアントレベルでの関連は、増殖性や神経生物学的文脈で観察される転写プログラムの破綻との関係を示唆しており、疾患関連の細胞モデルにおける機構解析研究の動機となります。CCDC89が経路の配線（ネットワーク構成）にどのような影響を与えるかを明らかにすることで、細胞状態の遷移、接着／運動性の表現型、ならびにプロテオスタシスに対する下流の影響を解明できます。

CCDC89 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CCDC89の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CCDC89 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CCDC89 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCCDC89転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CCDC89の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCCDC89遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCCDC89依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCCDC89発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCCDC89経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。