CCDC111 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404310

Visão geral

PRIMPOL (também conhecido como CCDC111) codifica a PrimPol, uma primase–polimerase que promove a tolerância a danos no DNA ao reiniciar (repriming) a síntese de DNA a jusante de lesões e ao auxiliar o reinício da forquilha de replicação. Essa atividade sustenta a estabilidade do genoma durante a fase S e se relaciona com vias envolvidas nas respostas ao estresse replicativo, no reparo pós-replicação e na manutenção da integridade do DNA mitocondrial e nuclear. O estresse replicativo desregulado e a passagem deficiente por lesões estão associados ao acúmulo de mutações e à instabilidade cromossômica, tornando o PRIMPOL um alvo relevante para o estudo de mecanismos que influenciam a manutenção do genoma associada ao câncer. Além disso, a função de PRIMPOL é frequentemente investigada no contexto de danos oxidativos, lesões induzidas por UV e eventos de troca de polimerase durante a recuperação de forquilhas estagnadas.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO CCDC111 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene PRIMPOL em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do PRIMPOL, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do PRIMPOL na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína CCDC111.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de PRIMPOL para a investigação da sinalização de CCDC111, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) PRIMPOL críticos para a função CCDC111
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos PRIMPOL para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo CCDC111 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo CCDC111 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus PRIMPOL. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo CCDC111 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR CCDC111 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia PRIMPOL para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo PRIMPOL definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.