CCDC109A CRISPR Activationプラスミド (h): sc-413850-ACT

MCU（CCDC109A）はミトコンドリアカルシウムユニポーター複合体の孔形成サブユニットをコードしており、ミトコンドリア内膜を介したCa2+取り込みを可能にすることで、細胞質Ca2+シグナルをミトコンドリア代謝へと結び付けます。マトリックスCa2+濃度を調節することにより、MCUはTCA回路脱水素酵素の活性化、酸化的リン酸化の効率、活性酸素種（ROS）シグナル伝達、ならびにストレス下での透過性遷移に対する感受性に影響を及ぼします。このミトコンドリアCa2+軸は、アポトーシス制御、バイオエネルギー適応、そして増殖や分化を司るCa2+依存性の転写プログラムとも交差します。MCU活性の破綻は、代謝状態の変化やミトコンドリアのストレス応答が関与する状況と関連づけられており、がん細胞のリモデリング、虚血性障害の機序、さらにはCa2+恒常性が乱れる神経筋疾患や神経変性表現型に関する研究などで示唆されています。

CCDC109A CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MCUの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CCDC109A CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MCU 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMCU転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CCDC109Aの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMCU遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCCDC109A依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMCU発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCCDC109A経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。