CBX7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402903-ACT

CBX7 (chromobox 7) é uma proteína do grupo Polycomb que atua como leitora de cromatina no PRC1 canônico, ao reconhecer H3K27me3 e ajudar a manter uma repressão transcricional estável. Por meio da regulação epigenética mediada por Polycomb, a CBX7 influencia o controle do ciclo celular, o comprometimento de linhagem, a senescência e a manutenção de longo prazo de programas de identidade celular. A expressão alterada de CBX7 ou a atividade desregulada do PRC1 tem sido associada a redes aberrantes de silenciamento gênico observadas em múltiplos contextos de câncer e em fenótipos relacionados ao desenvolvimento e ao envelhecimento. Como regulador nuclear da cromatina, a CBX7 é comumente estudada em vias que governam a memória transcricional e a compactação da cromatina.

CBX7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CBX7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CBX7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CBX7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CBX7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CBX7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CBX7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CBX7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CBX7 em células tumorais com expressão de CBX7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.