cathepsin F CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405658

概要

CTSFは、パパインファミリーに属するリソソーム局在性のシステインプロテアーゼであるカテプシンFをコードしており、細胞内およびエンドサイトーシスによって取り込まれた基質のタンパク質分解（プロテオリティックな代謝回転）に寄与します。カテプシンFは、リソソームを介した分解、オートファジー—リソソームフラックス、ならびに抗原プロセシング経路に関与し、細胞恒常性や免疫シグナル伝達の形成に影響を与えます。リソソームプロテアーゼ活性の乱れは、エンド—リソソーム輸送に対する下流の影響を通じて、タンパク質品質管理、オルガネラのリモデリング、細胞外マトリックスのプロセシングを変化させる可能性があります。CTSFは、リソソーム機能障害やプロテオスタシス（タンパク質恒常性）の破綻が主要な機序的特徴となる、神経変性および炎症性の表現型の文脈で研究されてきました。

cathepsin F CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるCTSF遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、CTSF内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、CTSFのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、cathepsin Fタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、cathepsin Fシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、CTSF欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• cathepsin Fの機能に不可欠なCTSFエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、CTSFゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• cathepsin F CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびcathepsin F CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、CTSF遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  cathepsin F HDRプラスミド（h）および cathepsin F HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはCTSFホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のCTSF標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。