CARD 9 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402214-ACT

カスパーゼリクルートメントドメイン含有タンパク質9（CARD9）は、主にミエロイド系細胞で発現するアダプタータンパク質であり、C型レクチン受容体のシグナルを下流の自然免疫応答へと連結する。真菌をはじめとする微生物リガンドを感知すると、CARD9はDectin-1やDectin-2などの受容体からのシグナルを統合し、NF-κBおよびMAPK経路の活性化、インフラマソーム関連サイトカイン産生の誘導、ならびにTh17偏向性の炎症プログラムの形成を促進する。CARD9の遺伝学的・機能的な改変は、宿主―微生物相互作用の変化や炎症制御の破綻と関連づけられており、その関連は侵襲性真菌感染への感受性から免疫介在性炎症表現型にまで及ぶ。パターン認識と転写制御の接点に位置するシグナルハブとして、CARD9はミエロイド活性化、サイトカインネットワーク、バリア免疫を司る経路の研究において広く注目されている。

CARD 9 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CARD9の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CARD 9 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CARD9 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCARD9転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CARD 9の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCARD9遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCARD 9依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCARD9発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCARD 9経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。