CARD 11 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402770-ACT

CARD11（CARMA1）は、カスパーゼリクルートメントドメイン（CARD）を含む足場タンパク質をコードしており、リンパ球において抗原受容体シグナルを下流の転写プログラムへと結び付けます。T細胞受容体（TCR）またはB細胞受容体（BCR）の刺激により、CARD11はCARD11–BCL10–MALT1（CBM）複合体の組み立てを促進し、NF-κB、JNK、p38 MAPK経路の活性化を可能にします。これらの経路は、増殖、サイトカイン産生、生存を制御します。CARD11活性の破綻は免疫シグナル伝達の異常やリンパ球の過剰活性化と関連し、複数のリンパ系悪性腫瘍で再発性の変異・異常が報告されています。シグナル伝達のハブとして、CARD11は適応免疫における受容体近位のシグナル伝達、ユビキチン依存的シグナルイベント、ならびに転写応答の解明のために頻繁に研究されています。

CARD 11 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CARD11の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CARD 11 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CARD11 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCARD11転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CARD 11の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCARD11遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCARD 11依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCARD11発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCARD 11経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。