Plasmide CRISPR d'Activation (h) CapG: sc-416526-ACT

CAPG code CapG, une protéine de liaison à l’actine dépendante du calcium de la famille gelsoline/villine, qui coiffe les extrémités barbées des filaments d’actine sans les sectionner, contribuant ainsi à l’organisation de l’actine corticale et au remodelage du cytosquelette. CapG régule la formation de replis membranaires, la phagocytose, l’adhésion cellulaire et la motilité, reliant des signaux extracellulaires à des changements dynamiques de l’architecture cellulaire. Ces activités relient CAPG à des voies contrôlant la polymérisation de l’actine et le trafic dépendant du cytosquelette, notamment des processus coordonnés par les GTPases de la famille Rho et la signalisation associée aux intégrines. Une expression dérégulée de CAPG a été associée à des phénotypes migratoires et invasifs altérés et est fréquemment étudiée dans le contexte de la progression tumorale, de la fonction des macrophages et des microenvironnements inflammatoires.

CapG Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CAPG sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CapG Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CAPG dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CAPG, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CapG. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CAPG natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CapG au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CapG dans les cellules tumorales présentant une expression de CAPG silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.