CAP1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405060-ACT

CAP1 umano (cyclase-associated protein 1) è un regolatore del turnover dell’actina e una proteina che lega i monomeri di actina, cooperando con la cofilina per promuovere il rimodellamento del citoscheletro. Modulando la dinamica dell’actina, CAP1 influenza la forma cellulare, l’adesione, la migrazione e l’endocitosi, collegandosi agli output di segnalazione delle GTPasi della famiglia Rho e delle vie associate alle adesioni focali. La riorganizzazione dell’actina dipendente da CAP1 influisce su processi quali il traffico di membrana e la meccanotrasduzione, frequentemente alterati nella biologia dei tumori e nei fenotipi invasivi. Un’espressione o un’attività deregolata di CAP1 è stata associata a programmi di motilità aberranti e a risposte allo stress modificate in molteplici contesti cellulari rilevanti per la patologia.

CAP1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CAP1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CAP1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CAP1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CAP1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CAP1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CAP1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CAP1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CAP1 nelle cellule tumorali con espressione di CAP1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.