CAML Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403690-ACT

CAMLG codifica o ligante de ciclofilina modulador de cálcio (CAML), uma proteína integral de membrana do retículo endoplasmático que acopla a sinalização intracelular de Ca²⁺ à biogênese de proteínas de membrana e a programas de sobrevivência celular. A CAML participa de processos de entrada de cálcio dependente de receptor e de entrada de cálcio operada por depleção de estoques (store-operated) e tem sido associada à regulação da ativação de linfócitos, ao controle da apoptose e à proteostase por vias associadas ao RE. Ao influenciar respostas transcricionais dependentes de cálcio e a sinalização de estresse, a CAML pode modular a proliferação e a função de células imunes. A desregulação da expressão de CAMLG ou do manejo de cálcio mediado por CAML tem sido associada a alterações na sinalização de sobrevivência e a fenótipos oncogênicos em modelos experimentais, sustentando sua relevância para estudos mecanísticos em câncer e biologia imunológica.

CAML O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CAMLG sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CAML O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CAMLG em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CAMLG, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CAML. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CAMLG nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CAML no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CAML em células tumorais com expressão de CAMLG silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.