Plasmide Double Nickase (h) CaMKIV: sc-400806-NIC

CAMK4 code la protéine kinase IV dépendante du calcium/de la calmoduline (CaMKIV), une kinase sérine/thréonine qui transmet les signaux Ca2+ de la calmoduline vers des programmes transcriptionnels nucléaires. CaMKIV est activée en aval de CaMKK et régule la phosphorylation de facteurs de transcription tels que CREB et MEF2, reliant la dynamique du calcium à l’expression génique, à la plasticité neuronale et à la différenciation dépendante de l’activité. Cette kinase participe à des voies contrôlant l’activation des cellules immunitaires et les réponses transcriptionnelles liées aux cytokines, et sa dérégulation a été étudiée dans des contextes incluant des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques ainsi que des troubles associés au système immunitaire. En tant que régulateur nucléaire sensible au Ca2+, CaMKIV est fréquemment utilisée pour étudier la transcription couplée aux stimuli et la signalisation associée à la chromatine dans des modèles cellulaires humains.

CaMKIV Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CAMK4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CAMK4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CAMK4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CAMK4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.