Plasmide Double Nickase (h) Calretinin: sc-401389-NIC

Le gène humain **CALB2** code la calrétinine, une protéine de liaison au calcium de type « EF-hand » qui tamponne le Ca2+ intracellulaire et module l’excitabilité dépendante du calcium, la transmission synaptique et la régulation de gènes dépendante de l’activité. La calrétinine est enrichie dans certaines populations d’interneurones et est également exprimée dans des tissus périphériques spécifiques, où elle contribue à la dynamique du cytosquelette et au trafic vésiculaire via des voies de signalisation régulées par le Ca2+. **CALB2** est couramment utilisé comme marqueur moléculaire de l’identité des sous-types neuronaux et de la différenciation mésothéliale, reliant son expression à des études sur l’organisation des circuits neuronaux et les programmes de lignée épithéliale. Une expression dérégulée de **CALB2** et une homéostasie calcique altérée ont été associées à des contextes neurodéveloppementaux et neurodégénératifs, ainsi qu’à la biologie tumorale dans certains types de tissus, ce qui en fait une cible utile pour la recherche mécanistique.

Calretinin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CALB2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CALB2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CALB2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CALB2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.